EC No. | EC |
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número CAS | |
Cofactor (es) | Hemo |
IUBMB | Entrada IUBMB |
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IntEnz | Vista IntEnz |
BRENDA | Entrada BRENDA |
KEGG | Entrada KEGG |
MetaCyc | Camino metabólico |
PRIAM | Perfil |
PDB | Estructuras |
IR | AmiGO / EGO |
La peroxidasa de rábano picante ( HRP , peroxidasa de rábano picante inglés ) es una oxidorreductasa que cataliza la reacción :
2 donantes fenólicos + H 2 O 2 2 radicales fenoxilo del donante + 2 H 2 O.Esta enzima es ampliamente utilizada en bioquímica , en particular durante los protocolos para la detección de moléculas durante la inmunohistoquímica o inmunotransferencia ( western blot ), así como por su acción catalítica durante las reacciones redox . Es una hemoproteína de la que se conocen numerosas isoformas , que varían en particular por la naturaleza de los orificios óseos ligados a ellas, siendo la más estudiada la isoenzima tipo C.
La enzima se observa con sustratos cuyo deterioro en presencia de peróxido de hidrógeno H 2 O 2puede ir seguido de espectrofotometría . Hay muchos sustratos diseñados para trabajar con peroxidasa de rábano picante, que cataliza la conversión de sustratos cromogénicos en compuestos coloreados o que produce luz a partir de sustratos quimioluminiscentes; se puede notar el ABTS , el OPD , el DAB (in) , el AEC (in) o el TMB para las reacciones coloreadas; el ácido homovanílico (fr) y tiramina para espectroscopía de fluorescencia ; el luminol para producir luz.
La peroxidasa de rábano picante es una glicoproteína de aproximadamente 44 kDa - 33,9 kDa para la holoenzima , 0,7 kDa para el cofactor ( hemo y cationes de calcio Ca 2+ ) y 9,4 kDa para la glicosilación , cuyos seis residuos de lisina se pueden conjugar para marcar la molécula. Esto da como resultado un derivado coloreado, fluorescente o luminiscente de la molécula marcada cuando se incuba con el sustrato correcto, lo que permite que se detecte y se mida la cantidad. La proteína HRP se usa a menudo en forma conjugada con una molécula diana que permite marcar para detección y cuantificación. Por ejemplo, un anticuerpo conjugado con peroxidasa de rábano picante puede detectar una pequeña cantidad de una proteína particular en una transferencia de Western . En este caso, el anticuerpo aporta la especificidad química que permite localizar la proteína de interés, mientras que la peroxidasa de rábano picante, en presencia de un sustrato adecuado, permite producir una señal detectable. La proteína HRP también se usa comúnmente en técnicas como el método ELISA inmunoabsorbente ligado a enzimas o incluso inmunohistoquímica debido a su naturaleza monomérica y la facilidad con la que da productos coloreados. En particular, es más pequeño, más estable y menos costoso que otras enzimas competidoras como la fosfatasa alcalina . Su velocidad de reacción, que es más rápida que la fosfatasa ácida o la β-galactosidasa, también permite producir señales fuertes en un tiempo relativamente corto. Sin embargo, rápidamente se vuelve inestable en presencia de altas concentraciones de fosfato.
Además de estas aplicaciones biomédicas, la peroxidasa de rábano picante también se usa para el tratamiento de cierta contaminación, en particular compuestos aromáticos hidroxilados en aguas residuales industriales.