El ensayo cometa ( ensayo Comet , en inglés) es una técnica de electroforesis en gel de agarosa . Permite medir las roturas inducidas directamente por un agente genotóxico e indirectamente durante los procesos de reparación de daños enzimáticos o durante procesos secundarios de fragmentación del ADN como la apoptosis .
Esta técnica fue desarrollada por Östling & Johansson en 1984 con el objetivo de detectar roturas de doble hebra en el ADN. Luego fue optimizado por Singh et al. en 1988 para detectar roturas de hebras simples y sitios lábiles a los álcalis. La electroforesis, en este caso, se realiza en condiciones fuertemente alcalinas para relajar y desenrollar el ADN superenrollado.
El nombre de la prueba se debe al aspecto microscópico de fluorescencia de las muestras después de la electroforesis, con cabezas y colas en forma de cometa .
Las células a analizar se separan de su soporte de cultivo para encerrarlas en un gel de agarosa de bajo punto de fusión ( agarosa de bajo punto de fusión ) y colocarlas en un portaobjetos de microscopio previamente “congelado” (cubierto con una subcapa de agarosa). Luego se someten a la acción conjunta de un detergente y un agente alcalino (pH 10) que tiene el efecto de lisar las células y permeabilizar los núcleos.
Estos se someten a electroforesis de bajo voltaje. Luego, el ADN se revela mediante la adición de un intercalador fluorescente.
El rendimiento de esta técnica es bajo porque una electroforesis corresponde a un tipo de célula / tóxico o concentración. Además, los resultados solo se pueden comparar si provienen de electroforesis realizada en conjunto.